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(二)抑癌基因
目前已被克隆的抑癌基因和未被克隆的候选抑癌基因已达20余种，而且新的抑癌基因还在不断出现。其中与卵巢癌有关的抑癌基因主要有p53、p16、p15、p2l、OVCA、PTEN、BRCA、nm23等。
1．Rb
Rb基因是第一个被克隆的抑癌基因，编码由928个氨基酸组成的105～llOkD的核内磷酸化蛋白pRb具有DNA结合活性。pRb蛋白的主要作用是与E2F／DP、E2F’一l等转录因子鳌合并使之失活，从而抑制细胞由Gl向S期的转换(Serror．n0 1997)。Rb基因的异常主要表现为等位基因缺失、基因突变和重排。卵巢肿瘤中Rb基因的异常并不常见。
2．p．s3
p53基因是研究最为广泛深入的肿瘤基因之一。人类肿瘤中约50％以上与p53基因变化有关。p53基因全长约20kb，定位于人类染色体17p13．1，由11个外显子组成，编码393个氨基酸组成的53kD的核内磷酸化蛋白。该蛋白可与蛋白质和DNA结合，参与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细胞凋亡等重要的生物学过程。p53基因分为野生型和突变型两种。
野生型p53蛋白极不稳定，半衰期只有数分钟，但具有反式激活功能和广谱的肿瘤抑制作用。在与HBV感染有关的肝癌研究中证明p53蛋白可与HBV的x蛋白结合使p53蛋白在细胞内聚集，并反式激活HBV在细胞内的复制。p53蛋白可调节基因转录，可与多瘤病毒的早期启动子结合，调节其下游的基因表达；可正调节一些在细胞增殖周期调控过程中起关键作用的基因，包括可调节CDK活性的p2l和DNA损伤导致细胞生长受阻相关的GADI)45基因，达到控制细胞周期和维持基因和细胞遗传稳定性的目的；结果当细胞DNA受到损伤后便停止DNA的复制，使细胞停留在G1期修复DNA损伤，然后进入s期；如果DNA损伤严重而不能修复则会出现程序化死亡(曾益新1999)。另外，野生型p53对于使DNA损伤的细胞阻滞在G2期也是必需的(Bunz 1998)。
p53突变可影响与DNA相互作用的关键氨基酸，也可由于突变的p53蛋白发生错误重叠而不能与特定的DNA识别序列相结合。p53突变后不仅失去了抑癌基因的作用，而且突变型p53蛋白具有癌基因的作用，能促进细胞恶性转化。p53基因的缺失或突变是许多肿瘤发生的原因之一，不同种类的人类肿瘤中，p53基因的突变频率可达50％一60％，突变的形式可表现为点突变、缺失突变、插入突变、移码突变、基因重排等，其中p53基因突变或等位基因缺失是导致053蛋白异常表达的主要原因。由于053蛋白产物是二聚体，突变型p53蛋白的半衰期又长达6～12小时，突变型p53蛋白可与正常的r,53蛋白形成稳定的复合物，这样就会有力地阻断正常053的功能，并且肿瘤组织中检测到p53蛋白的过度表达通常提示p53基因存在突变。
正常卵巢组织或良性卵巢病变中无p53基因异常表达。卵巢癌中，50％有p53过度表达，伴有p53基因高度保守区编码序列的改变，位于第5～8个外显子；无p53基因过度表达的癌组织中，053基因维持野生型序列；可见，P53基因过度表达与基因突变密切相关。另外，053过度表达与晚期卵巢癌(Ⅲ／Ⅳ期)的异倍体率明显相关；早期卵巢癌(I／Ⅱ期)中053的过度表达率约为29％，I
a／I b期肿瘤中为15％；而I c和Ⅱ期中则为44％，基本上与Ⅲ／Ⅳ期肿瘤一致，提示p53过度表达与卵巢癌的发展似更为密切。p53基因突变和过度表达与卵巢癌的分化、复发及预后的关系尚未肯定，由053基因突变引起细胞恶性转化的分子机制也未完全明了。有研究发现，p53基因的突变通常伴有另一个等位基因的缺失；如果一个等位基因缺失而另一个等位基因有一个无意义突变，p53基因的抑瘤功能也会丧失。卵巢癌中053等位基因缺失率为33％、75％、甚至80％。
3．p16
p16基因基因位于染色体9p21区，由两个内含子和三个外显子组成，总长约8．5Kb，编码148个氨基酸残基构成的p16蛋白。该蛋白的主要功能是与细胞周期素依赖性激酶(cyelin．depend—ent kinase，CDK)CDK4／6结合，特异性抑制CDK4／6-Cyclin D复合物的激酶活性和pRb磷酸化，从而通过p16／CDK4／6／Cyclin D1／pRb／E2F途径作用于细胞Gl·s期转换控制点(check point)，在肿瘤发生和细胞周期调控中起特别重要的抑制作用。正常组织中p16mRNA水平很低，但仍可通过RT-PCR检测到。肿瘤组织中p16基因存在过度表达和表达缺失两种方式。p16／CDK4／Cyclin D1／pRb/E2F途径中各因子的异常均可引起p16基因表达增强，p53基因失活也可增强p16基因表达，并且HPVE6癌蛋白(+)的成纤维细胞虽然p16基因表达强烈，但仍不断增殖，说明p16表达增强尚不足以抑制CDK4-Cyclin D激酶活性。因此，p16基因高表达是继发于细胞过度增殖、癌基因激活或其他的抑癌基因失活的事件，是肿瘤发生的结果而不是原因(Serrano 1997)。
p16基因失活已见于多种人类恶性肿瘤。其失活频率各家报道不尽一致，这可能与肿瘤组织来源、细胞学类型、是原发肿瘤还是肿瘤诱生细胞系、以及检测方法的不同有关。卵巢癌中p16基因总失活率仅为20％一37％，其中内膜样癌为57％，粘液癌为43％一56％，而占卵巢癌大多数的浆液性癌仅7％一24％，卵巢癌细胞系中则为40％～60％。p16基因失活机制主要有基因缺失、突变、5’-CpG岛过度甲基化、转录后抑制或其他失活机制。p16基因缺失分为纯合性缺失半合性缺失两种。纯合性缺失率在卵巢癌细胞系中为45％。半合性缺失时，未缺失基因能正常表达则无p16基因失活；反之，若发生突变或甲基化，则可引起基因失活。p16基因突变多发生于半合性缺失的未缺失等位基因，包括点突变、部分核苷酸序列缺失、易位、重排、或插入其他序列。其中点突变最常见，已发现的有146种之多，可涉及多个密码子，以第140位密码子突变多见；缺失突变、插入或连接突变也有50余种。基因突变后可引起基因转录抑制或蛋白质序列改变。卵巢癌中p16基因突变率仅14％。p16基因启动子区、外显子1和2均含有多个5’-GpG岛，这些区域的过度甲基化均可引起基因转录抑制、表达缺失或仅微弱表达。经5-氮-2’-脱氧胞苷(5．aza—CdR)去甲基化处理后，野生型p16基因恢复表达，且呈剂量依赖性，但启动子区微弱或部分甲基化则不影响基因表达。卵巢癌中p16基因过度甲基化率在p16蛋白(一)者为46％～50％，p16蛋白(+)者仅O％一3％。另外，部分卵巢癌细胞系中虽然有p16 mRNA表达，但蛋白质(一)，推测p16基因失活可能是转录后抑制所致；26％卵巢癌p16蛋白(一)且未发现基因缺失、突变或过度甲基化，因此可能存在其他的p16基因失活机制，是否为转录后抑制尚待研究(Milde．1angosch 1998。Fujita 1997，Wong 1999，Mc—Cluskey 1999)。
4．p15
p15基因又称MTS2基因，与p16在基因结构、生化特性等方面有许多相似之处。p15基因全长约460kb，定位于人类染色体9p21，编码137个氨基酸、分子量为14．7kD的胞浆蛋白质。p15与p16的基因序列有95％同源，有2个外显子E1和E2，与p16同源部分为E2。E2位于p16第1外显子上游约20kb处，El位于E2上游2．5kb处。p15基因在许多组织都有表达，其主要功能可能是通过与CDK4／6结合，抑制CDK4／6-Cyclin D，从而抑制细胞增殖。p15基因的转录可被TGF-β诱导，提示p15使细胞停止在G1期的生长抑制作用可能通过接触抑制、作为细胞生长抑制信号的效应因子而起作用。研究发现，p16纯合性缺失的细胞系中80％存在p15失活，但p15基因的表达与Rb基因无关。肿瘤组织中p15基因失活表现为纯合性缺失或过度甲基化，而突变不是常发事件，其中以纯合性缺失为主要失活机制。p15基因转录启动子区和外显子E1也有多个5-cpG岛，这些区域的过度甲基化也可导致基因转录抑制。然而p15基因作为一种新的抑癌基因，对其研究只能说是刚刚开始，卵巢癌中p15基因失活、表达及其与肿瘤的关系的研究则更少，许多问题需进一步探索(曾益新1999)。
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